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微柱液相色譜-電化學(xué)法檢測鼠紋狀體單胺類物質(zhì)的含量
單胺類神經(jīng)遞質(zhì)(Monoamines), 包括兒茶酚胺(Catecholamine)和5-羥色胺(Serotonin), 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起重要作用. 對其含量的準(zhǔn)確測定在基礎(chǔ)研究和臨床診斷中均具有重要的意義. 微透析是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的活體取樣技術(shù)[1], 為腦功能的研究提供了極為有力的手段, 本實驗室在此方面進行了多年的研究[2,3]. 微透析與液相色譜電化學(xué)檢測聯(lián)用[4], 可測定神經(jīng)細(xì)胞外液遞質(zhì)的含量及釋放量, 據(jù)此可對一系列重要的生理、病理和藥理現(xiàn)象做出解釋. 但使用常規(guī)高效液相色譜柱(?=4.6 mm i.d.)尚存在不足之處. 首先, 透析液中神經(jīng)遞質(zhì)的濃度很低, 接近甚至低于檢測器的濃度檢出限; 其次, 為使樣品得到較好檢測, 需加大進樣量(通常需25 μL), 從而需更長的取樣時間, 使得方法的時間分辨率降低, 難以反映體內(nèi)的動態(tài)變化. 為克服這些缺點, 近年來, 微柱液相色譜電化學(xué)檢測(Microbore HPLC-ECD)技術(shù)受到了重視[5], 高效微徑柱的使用大大降低了峰展寬效應(yīng), 抑制了組分的稀釋, 極大地提高了檢測靈敏度. 同時, 進樣量的降低也使得時間分辨率得以提高(進樣量為1~5 μL, 相當(dāng)于采樣時間1~5 min), 使以分鐘為單位的動態(tài)檢測成為可能. 本文采用Microbore HPLC-ECD的方法, 建立了測定鼠腦紋狀體內(nèi)DA, DOPAC, 5-HIAA和HVA含量的方法, 實現(xiàn)了采樣間隔為5 min的動態(tài)檢測.
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