在畢赤酵母中表達(dá)人溶菌酶蛋白的研究

在畢赤酵母中表達(dá)人溶菌酶蛋白的研究

將化學(xué)合成的人溶茵酶基因艦hLYZ(444 bp)構(gòu)建到畢赤酵母分泌型表達(dá)載體pPICZ上;載體質(zhì)粒用Sac I線性化后電擊法轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌株GS115.在舍Zeocin的抗性培養(yǎng)基篩選后PCR鑒定獲得了9株重組菌株.重組菌株經(jīng)甲醇誘導(dǎo)后取表達(dá)上清液進(jìn)行SDS-PAGE電泳和Western blot分析.結(jié)果顯示,重組hLYZ在畢赤酵母中成功表達(dá),在誘導(dǎo)60 h時(shí)表達(dá)量最高.用鎳親和層析柱純化重組hLYZ,用Bradford法測(cè)得其含量約為324 mg·L-1.比濁法活性測(cè)定結(jié)果顯示所表達(dá)的重組人溶茵酶活性達(dá)到4473 U.mL-1.本研究利用畢赤酵母分泌型表達(dá)載體成功表達(dá)了重組人溶菌酶,并探索了簡(jiǎn)單有效的純化和活性測(cè)定方法,為利用畢赤酵母系統(tǒng)規(guī)模化生產(chǎn)重組人溶菌酶奠定了技術(shù)基礎(chǔ).

作 者： 胡喬 趙凌俠 唐克軒 HU Qiao ZHAO Ling-xia TANG Ke-xuan   作者單位： 胡喬,HU Qiao(上海交通大學(xué),農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院,上海,200240;上海交通大學(xué),生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,上海,200240)

趙凌俠,唐克軒,ZHAO Ling-xia,TANG Ke-xuan(上海交通大學(xué),農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院,上海,200240) 

刊 名： 上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)科學(xué)版）  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)  年，卷(期)： 2008 26(3)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 人溶菌酶   畢赤酵母   生物活性  

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