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3-甾酮-1-脫氫酶基因在大腸桿菌中的表達(dá)及甾體轉(zhuǎn)化研究
將簡單節(jié)桿菌3-甾酮-1-脫氫酶基因(ksdD)克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pET-22b(+)上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-ksdD,利用IPTG誘導(dǎo)酶在大腸桿菌BL21(DE3)中的表達(dá),4h后取樣,分別對(duì)超聲破碎后的上清和沉淀進(jìn)行SDSPAGE和酶活分析,結(jié)果表明表達(dá)出的3-甾酮-1-脫氫酶的分子量大約為56kD,超聲破碎后的細(xì)胞破碎液對(duì)4-AD的轉(zhuǎn)化率較簡單節(jié)桿菌提高了近10倍.
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