獐ISSR-PCR反應體系的建立與優化及引物篩選

獐ISSR-PCR反應體系的建立與優化及引物篩選

利用正交試驗L16(45)對影響獐(Hydropotes inermis)ISSR-PCR反應的Taq DNA聚合酶濃度、dNTP濃度、引物濃度、Mg2+濃度及模板DNA濃度5個因素在4個水平上進行優化,同時對退火溫度進行梯度PCR反應,以建立適合于獐ISSR-PCR反應的最佳體系.最終確定獐25μL ISSR-PCR反應體系為:Taq酶1.25 U·25μL-1、Mg2+濃度2.5 mmol·L-1、引物濃度0.3 μmol·L-1、DNA模板量350 ng·25μL-1、dNTP濃度0.15 mmol·L-1.在此基礎上,利用優化的反應體系成功篩選出10條用于獐相關研究的ISSR引物并確定了各自的最佳退火溫度,為今后利用ISSR技術進行獐的物種鑒定與分類、親緣關系、系統發育和生理病理學研究奠定了技術基礎,也為開展其它大型資源動物如黑麂的保護遺傳學研究提供理論基礎.

作 者： 張龍龍 鮑毅新 于華會 許婧 孫波 ZHANG Long-long BAO Yi-xin YU Hua-hui XU Jing SUN Bo   作者單位： 張龍龍,鮑毅新,許婧,孫波,ZHANG Long-long,BAO Yi-xin,XU Jing,SUN Bo(浙江師范大學生態研究所,金華,321004)

于華會,YU Hua-hui(中國林業科學研究院亞熱帶林業研究所,浙江,富陽,311400) 

刊 名： 生態科學  英文刊名： ECOLOGICAL SCIENCE  年，卷(期)： 2009 28(4)  分類號： Q953 Q959.842  關鍵詞： 獐   正交試驗   ISSR   引物篩選  

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