一種通用高效的復(fù)雜載體構(gòu)建的新方法

一種通用高效的復(fù)雜載體構(gòu)建的新方法

文章報(bào)道了一種簡(jiǎn)便、通用、高效的復(fù)雜載體構(gòu)建方法.此法是在PCR引物設(shè)計(jì)時(shí),在目的片段5′端加上隨機(jī)設(shè)計(jì)的接頭,利用PCR克隆目的片段,再用T4 DNA聚合酶3′→5′外切酶活性處理PCR克隆目的片段,產(chǎn)生多個(gè)首尾相匹配的黏性末端,進(jìn)行多片段定向連接、轉(zhuǎn)化、重組子鑒定.以7片段拼接的水稻單交換質(zhì)體定點(diǎn)整合表達(dá)載體pRSMGA的構(gòu)建為例,應(yīng)用上述方法構(gòu)建只需做兩次連接、轉(zhuǎn)化,且其重組、轉(zhuǎn)化效率高.數(shù)10次實(shí)驗(yàn)證明:這是一種簡(jiǎn)便、通用、高效的復(fù)雜構(gòu)建載體的方法,該法至今尚未見(jiàn)報(bào)道.

作 者： 陸云華 馬立新 蔣思婧 LU Yun-Hua MA Li-Xin JIANG Si-Jing   作者單位： 陸云華,LU Yun-Hua(湖北大學(xué)生命科學(xué)院分子微生物與基因工程實(shí)驗(yàn)室,武漢,430062;宜春學(xué)院生物工程系,江西,宜春,336000)

馬立新,蔣思婧,MA Li-Xin,JIANG Si-Jing(湖北大學(xué)生命科學(xué)院分子微生物與基因工程實(shí)驗(yàn)室,武漢,430062) 

刊 名： 遺傳  ISTIC PKU 英文刊名： HEREDITAS(BEIJING)  年，卷(期)： 2006 28(2)  分類(lèi)號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 復(fù)雜載體構(gòu)建   新方法   T4   DNA聚合酶   水稻  

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