人載脂蛋白A-Ⅰ的原核表達及二級結構和功能鑒定

人載脂蛋白A-Ⅰ的原核表達及二級結構和功能鑒定

目的為獲得高產量并具有正常結構和生物學活性的原核表達人載脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ).方法利用DNA重組技術對人apoA-Ⅰ的前8個氨基酸引入沉默突變,以pET-30b(+)為原核表達載體,在apoA-Ⅰ多肽鏈C-末端引入6×組氨酸標簽,采用鎳親和層析對表達蛋白進行純化.分別使用圓二色分析、濁度澄清試驗和膽固醇外流試驗對重組apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂質結合動力學及促細胞膽固醇外流能力進行評價.結果獲得高表達產量的重組apoA-Ⅰ(12 mg純化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重組蛋白的α螺旋含量為(54±4)%,脂質結合動力學速率常數k1/2為0.059±0.002 min-1,膽固醇外流百分比為(16.68±1.77)%.結論可獲得高產量并具有生物學活性的重組人apoA-Ⅰ;為構建apoA-Ⅰ其他突變體提供模式.

作 者： 祝學衛 吳鋼 曾武威 薛紅 陳保生 ZHU Xue-wei WU Gang ZENG Wu-wei XUE Hong CHEN Bao-sheng   作者單位： 中國醫學科學院,中國協和醫科大學,基礎醫學研究所,醫學分子生物學國家重點實驗室,北京,100005  刊 名： 基礎醫學與臨床  ISTIC PKU 英文刊名： BASIC & CLINICAL MEDICINE  年，卷(期)： 2006 26(4)  分類號： Q816  關鍵詞： 人載脂蛋白A-Ⅰ   原核表達   α螺旋含量   脂質結合   細胞膽固醇外流  

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