脫氫奎尼酸合成酶和奎尼酸脫氫酶基因在大腸桿菌中的共表達

脫氫奎尼酸合成酶和奎尼酸脫氫酶基因在大腸桿菌中的共表達

目的:構建共表達載體pETDuet-aroB-qutB,在大腸桿菌中同時表達奎尼酸合成途徑中的關鍵酶脫氫奎尼酸合成酶(DHQase)和奎尼酸脫氫酶(QDHase).方法:分別以大腸桿菌(B21)和構巢曲霉(ATCC 24919)基因組為模板,采用PCR法擴增得到脫氫奎尼酸合成酶基因aroB和奎尼酸脫氫酶基因qutB,克隆接入pETDuet-1載體中,轉化入大腸桿菌BL21,在宿主菌中共表達脫氫奎尼酸合成酶和奎尼酸脫氫酶.結果:獲得了包含pETDuet-aroB-qutB共表達載體的重組大腸桿菌.IPTG(0.5 mmol/L)誘導重組菌4 h后,脫氫奎尼酸合成酶和奎尼酸脫氫酶表達量分別占菌體總蛋白的18.7%和30.5%,酶活力為70.4 U/L、40.2 U/L,分別提高了14.1倍和22.3倍.結論:實現了脫氫奎尼酸合成酶和奎尼酸脫氫酶基因在大腸桿菌中的高效共表達,為基因工程法生物合成奎尼酸奠定了基礎.

作 者： 周長林 楊毅剛 竇潔 ZHOU Chang-lin YANG Yi-gang DOU Jie   作者單位： 中國藥科大學生命科學與技術學院,南京,210009  刊 名： 中國藥科大學學報  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 37(4)  分類號： Q78  關鍵詞： 脫氫奎尼酸合成酶   奎尼酸脫氫酶   奎尼酸   生物合成  

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