正交優化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反應體系

正交優化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反應體系

根據正交試驗設計的原理,設計了探索性正交試驗和細調性正交試驗來確定沙打旺ISSR-PCR體系中各成分的濃度.得到既穩定又能擴出最多條帶的適合沙打旺的ISSR-PCR最佳反應體系,即20 μl的反應體系中含有1×buffer,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.0 U,引物0.3 μmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,DNA模板2.5 ng/μl.然后對沙打旺ISSR-PCR最佳反應體系進行梯度退火試驗,得到這條引物的最佳退火溫度為54.1 ℃.這一最佳體系的建立為今后利用ISSR標記技術,研究沙打旺的遺傳多樣性提供了標準化程序.

作 者： 陳志宏 黃琳凱 張新全 王志剛   作者單位： 陳志宏,王志剛(全國畜牧獸醫總站畜禽牧草種質資源保存利用中心,北京,100094)

黃琳凱,張新全(四川農業大學動物科技學院草業科學系,四川雅安,625014) 

刊 名： 安徽農業科學  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 34(13)  分類號： Q946-33  關鍵詞： 沙打旺   ISSR   正交優化   反應體系  

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