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苦瓜MAP30基因的畢赤酵母表達(dá)載體構(gòu)建及重組菌株的篩選
目的:從苦瓜中克隆MAYO全長(zhǎng)基因,并將該基因連接至表達(dá)載體pPIC9中,建立酵母菌落PCR篩選方法.方法采用改良SDS法從苦瓜表皮中提取基因組DNA,設(shè)計(jì)特異件的引物,通過PCR技術(shù)擴(kuò)增出全長(zhǎng)861bp的MAP30基因.該基因經(jīng)Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ雙酶切,連接至畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9中.重組載體轉(zhuǎn)化GS115菌株,運(yùn)用菌落PCR鑒定重組菌株.結(jié)果:基因測(cè)序表明,該基因已成功插入酵母表達(dá)載體pPIC9α-factor分泌信號(hào)下游,同源性分析表明該基因與GeneBank(AF284811)的核骨酸同源性達(dá)99.9%,氨基酸同源性達(dá)100%.菌落PCR顯示外源基因已整合人酵母GS115菌株中.結(jié)論:成功地克隆了MAP30全長(zhǎng)基因,并構(gòu)建了含MAP30基因的重組畢赤酵母表達(dá)載體,并獲得了整合菌株,為下一步研究奠定了基礎(chǔ).
作 者： 楊威威 沈曉曉 鄭珍珍 朱振洪 作者單位： 浙江中醫(yī)藥大學(xué)生物工程學(xué)院,浙江杭州,310053 刊 名： 生物技術(shù) PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 20(2) 分類號(hào)： Q782 Q784 關(guān)鍵詞： 苦瓜 MAP30 畢赤酵母 表達(dá)載體 Momordica charantia L MAP30 Pichia pastoris expression vector【苦瓜MAP30基因的畢赤酵母表達(dá)載體構(gòu)建及重組菌株的篩選】相關(guān)文章：
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