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人朊蛋白基因的克隆與原核表達
以人血液中提取的總DNA為模板,克隆朊蛋白(prion protein, PrP)基因Prnp的開放閱讀框(ORF),與pMD-18T載體連接后轉入E.coli JM109,用Blast軟件比較重組質粒序列,結果表明獲得的人Prnp的ORF與Genbank登錄的相應核苷酸序列最高同源性為99.6 %,推導的氨基酸序列同源性為99.8 %.將編碼人成熟PrP的基因定向克隆到pET-30a(+)表達載體,將重組質粒pET-homPrP轉化E.coli BL21(DE3),在37 ℃下用1.0 mmol/L IPTG誘導,重組融合蛋白獲得高效表達,SDS-PAGE顯示表達產物以包涵體形式存在,占菌體總蛋白的20 %～25 %.用Ni-NTA樹脂親和層析純化了表達產物.Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的單克隆抗體特異識別.因此,在大腸桿菌中表達的人成熟PrP融合蛋白可以作為制備PrP抗體的免疫原.
作 者： 姜海霞 劉永生 楊孝樸 陳豪泰 朱小玲 張杰 謝慶閣 JIANG Hai-xia LIU Yong-sheng YANG Xiao-pu CHEN Hao-tai ZHU Xiao-ling ZHANG Jie XIE Qing-ge 作者單位： 姜海霞,朱小玲,JIANG Hai-xia,ZHU Xiao-ling(甘肅農業大學動物醫學院,甘肅,蘭州,730070;中國農業科學院蘭州獸醫研究所家畜疫病病原生物學國家重點實驗室,農業部畜禽病毒學重點開放實驗室,甘肅,蘭州,730046)劉永生,陳豪泰,張杰,謝慶閣,LIU Yong-sheng,CHEN Hao-tai,ZHANG Jie,XIE Qing-ge(中國農業科學院蘭州獸醫研究所家畜疫病病原生物學國家重點實驗室,農業部畜禽病毒學重點開放實驗室,甘肅,蘭州,730046)
楊孝樸,YANG Xiao-pu(甘肅農業大學動物醫學院,甘肅,蘭州,730070)
刊 名： 甘肅農業大學學報 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 2006 41(3) 分類號： Q785 Q786 關鍵詞： 人 朊蛋白基因 克隆 原核表達【人朊蛋白基因的克隆與原核表達】相關文章：
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