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人血紅素加氧酶-1的原核表達、純化及其中和抗體的制備
目的 確定人血紅素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)在大腸埃希菌中的表達條件與純化方法,利用純化的蛋白制備具有中和活性的hHO-1多克隆抗體.方法 將hHO-1原核表達質粒pMW172/hHO-1轉入大腸埃希菌菌株BL21,通過改變搖床轉速、誘導劑IPTG濃度和培養時間確定hHO-1蛋白的最佳可溶性表達條件;利用超聲破碎、高速離心、分級鹽析、分子篩層析等方法純化hHO-1蛋白,建立體外HO-1活性測定方法檢測hHO-1蛋白的活性;利用純化的hHO-1活性蛋白作為抗原免疫新西蘭兔,制備多克隆抗體;利用ELISA方法和Western印跡技術分別測定抗體的效價和特異性,通過HO-1活性測定檢測抗體的中和活性.結果 確定hHO-1最佳可溶性表達條件為:37 ℃、200 r/min培養3 h后,0.1 mmol/L IPTG誘導培養4 h.超聲破碎菌體,上清經30%～40%鹽析純化及分子篩層析純化,獲得活性hHO-1蛋白,收得率為30.3%,純化倍數為2.83倍,純度為90 %.制備的抗hHO-1的兔血清效價達到10~6,并能中和掉46 % hHO-1的催化活性.結論 為hHO-1蛋白的表達和純化以及多克隆抗體制備確立了可行的技術方案;獲得了高純度活性hHO-1蛋白及hHO-1多克隆抗體,為HO-1功能、結構研究,以及相關疾病研究奠定了基礎.
作 者： 魏旭冉 楊軍 劉慶軍 王波 周虹 WEI Xuran YANG Jun LIU Qingjun WANG Bo ZHOU Hong 作者單位： 軍事醫學科學院野戰輸血研究所,北京市,100850 刊 名： 醫學分子生物學雜志 ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 2010 7(2) 分類號： Q55 關鍵詞： 血紅素加氧酶 原核表達 可溶性表達 純化 中和抗體 heme oxygenase-1 prokaryotic expression soluble expression purification neutralization antibody【人血紅素加氧酶-1的原核表達、純化及其中和抗體的制備】相關文章：
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