雞新城疫病毒HeB02分離株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究

雞新城疫病毒HeB02分離株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究

根據(jù)GenBank報道的雞新城疫病毒F基因序列設計了一對引物,以雞新城疫病毒HeB02分離株基因組為模板,通過RT-PCR擴增出了1.66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因與國內(nèi)標準強毒株F48 E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分別為88.1%、84.9%和83.8%.將HeB02株F基因插入真核表達載體pVAX1中,構建了真核表達質(zhì)粒pSV-F,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染COS-7細胞,SDS-PAGE分析可見表達的特異蛋白條帶;Western blot、ELISA和中和試驗檢測結(jié)果表明:真核表達的蛋白與抗新城疫病毒的抗體發(fā)生特異性反應,說明F蛋白具有很好的免疫原性.采用活體電擊法以真核表達質(zhì)粒pSV-F免疫3周齡SPF雞,劑量為50μg/只,3周后加強免疫1次,5周后以100倍雞胚感染劑量(EID)的F基因同源病毒對所有雞進行攻毒,攻毒前后每周分別以喉拭子進行病毒分離和HI效價測定.結(jié)果顯示對照組在攻毒前一直沒有檢測到抗體效價,攻毒后檢測效價為3.0 log2±1.40,并且于攻毒后第9天全部死亡;活疫苗組和實驗組免疫后第2周檢測到抗體效價,第5周最高,HI效價分別為8.3 1og2±1.30和7.2log2±1.23,攻毒1周后HI效價分別達9.8log2±1.55和8.9log2±1.77,極顯著高于對照組(P＜0.01).免疫組未分離到新城疫病毒,對照組全部分離到新城疫病毒.表明所構建的F基因真核表達質(zhì)粒可作為候選基因疫苗誘導雞產(chǎn)生免疫保護反應.

作 者： 李楠 孫一敏 趙寶華 LI Nan SUN Yi-Min ZHAO Bao-Hua   作者單位： 河北師范大學生命科學學院,石家莊,050016  刊 名： 生物工程學報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號： Q785  關鍵詞： 新城疫病毒   F基因   克隆和表達   DNA疫苗  

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