β淀粉樣肽單克隆抗體可變區基因的5RACE擴增及序列分析

β淀粉樣肽單克隆抗體可變區基因的5RACE擴增及序列分析

目的:克隆并分析抗β淀粉樣肽單克隆抗體輕鏈與重鏈可變區基因.方法:從分泌抗β淀粉樣肽單克隆抗體的雜交瘤細胞株A8中提取總RNA,根據恒定區序列設計基因特異性引物,通過5'RACE法擴增抗體的輕鏈和重鏈可變區基因,測定并分析可變區基因序列,并克隆入pMD18-T載體.結果:重鏈可變區基因序列全長450 bp,編碼150個氨基酸殘基;輕鏈可變區基因序列全長429 bp,編碼143個氨基酸殘基.在GeneBank中對氨基酸序列進行比對分析,二者均符合小鼠IgG可變區基因的特征.根據Kabat法則對A8抗體輕鏈和重鏈可變區氨基酸序列基因進行分析并確定了3個抗原互補決定區(CDR)、4個框架區(FR)和信號肽.結論:通過5'RACE法得到了抗β淀粉樣肽單克隆抗體輕鏈與重鏈可變區基因,為進一步研究抗體三維結構,以及對該抗體進行人源化改造奠定了基礎.

作 者： 王鑫 張瑩 何金生 WANG Xin ZHANG Ying HE Jin-Sheng   作者單位： 北京交通大學,生物科學與技術研究所,北京,100044  刊 名： 生物技術通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號： Q78  關鍵詞： β淀粉樣肽   單克隆抗體   可變區序列   5'RACE  

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