磁珠富集法開發北柴胡多態性簡單序列重復標記

磁珠富集法開發北柴胡多態性簡單序列重復標記

目的:利用磁珠富集法分離北柴胡微衛星序列,以開發北柴胡微衛星引物,獲得有多態性的簡單序列重復(SSR)標記.方法:用生物素標記的混合探針(AC)15、(AG)15、(MAB)12和兩端連接已知序列人工接頭的北柴胡基因組DNA酶切片段混和后與磁珠雜交,構建微衛星序列富集的小片段插入文庫;利用接頭引物分別與生物素探針引物Biotin-(AC)15、Biotin-(AG)15、Biontin-(MAB)12形成3個組合,用PCR方法對文庫進行初步篩選;對可能的陽性克隆子進行測序復篩,選取微衛星側翼序列足夠長的序列設計引物,用熒光標記的基因分型技術以栽培柴胡種質為材料分析其多態性.結果:開發了5對多態性SSR標記,它們在5份柴胡栽培種質中共擴增出30.70個多態性等位基因,平均每條引物可以擴增出6.14個多態性等位基因;觀察等位基因數最多13個,最少3個;有效等位基因數最多11.4個,最少1.6個.同時分析了4對EST-SSR引物,比較了2種SSR標記擴增結果.結論:磁珠富集法是開發柴胡多態性SSR標記的有效方法.

作 者： 陳懷瓊 鄭亭亭 魏建和 隋春 CHEN Huai-Qiong ZHENG Ting-Ting WEI Jian-He SUI Chun   作者單位： 中國醫學科學院北京協和醫學院,藥用植物研究所,北京,100193  刊 名： 生物技術通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號： Q75  關鍵詞： 柴胡   簡單序列重復   磁珠富集法   基因分型  

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