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羽衣甘藍S13-b位點受體激酶基因的克隆及激酶結構域的原核表達
目的:分離羽衣甘藍S13-b位點受體激酶(SRK13-b)基因并進行序列及結構域分析,構建SRK13-b結構域的原核表達載體并進行重組蛋白質的原核表達和純化.方法:提取羽衣甘藍S13-bS13-b自交不親和系花期柱頭的RNA,用RTPCR法分離SRK13-b基因;將編碼SRK13-b激酶結構域的序列插入大腸桿菌表達載體pET-14b中,構建原核表達質粒pET-SRK13-bCT,轉化大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株,經0.1 mmol/L IPTG誘導,用Ni-NTA親和層析柱對SRK13-b激酶結構域蛋白進行純化.結果:分離獲得羽衣甘藍SRK13-b基因的長度為2571 bp,編碼856個氨基酸,GenBank收錄號為EU180597;對SRK13-b激酶結構域蛋白進行誘導表達及純化,SDS-PAGE顯示相對分子質量約43×103的蛋白質特異表達,對表達產物進行分離純化,獲得了SRK13-b激酶結構域的融合蛋白.結論:羽衣甘藍SRK13-b基因的克隆及激酶結構域的原核表達,為研究SRK的功能及自交不親和性奠定了基礎.
作 者： 藍興國 楊佳 王艷紅 李玉花 LAN Xing-Guo YANG Jia WANG Yan-Hong LI Yu-Hua 作者單位： 東北林業大學,生命科學學院,黑龍江,哈爾濱,150040 刊 名： 生物技術通訊 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 21(2) 分類號： Q78 關鍵詞： 羽衣甘藍 自交不親和 S13-b位點受體激酶 原核表達 純化【羽衣甘藍S13-b位點受體激酶基因的克隆及激酶結構域的原核表達】相關文章：
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