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用Taqman MGB探針研究中國人群TNF-α基因啟動子區單核苷酸多態性
[目的]了解中國人群腫瘤壞死因子α(the tumour necrosis factor α,TNF-α)基因啟動子區多態性.[方法]隨機選取20名深圳地區漢族健康體檢者,采用兩對引物PCR擴增TNF-α基因啟動子區(-1389nt~+125 nt),對PCR產物進行序列分析,尋找單核苷酸多態性位點(single nucleotide polymorphisms,SNPs).采用Taqman MGB探針建立了-857nt(C/T)位點的實時定量PCR(the real-time PCR)分型方法,并對中國漢族、壯族、布依族,水族及苗族群體共1 108份樣本進行了基因分型.[結果]在啟動子區(-1322nt~+67 nt),發現6個SNP位點,即-885(A/G)、-863(C/A)、-646(G/A)、-648(G/A)、-568(G/C)和-857(C/T,其中位點-646 nt(G→A)為新發現SNP.-885、-648及-568nt位點堿基雖然與Genbank不同,但測序的20個個體基因分型相同.中國人群-857nt(C/T)位點基因型頻率分別為0.79(CC),0.19(CT)和0.02(TT),中國漢族、壯族、布依族,水族及苗族群體間無顯著性差異.中國人群-857T等位基因頻率為0.116,與文獻報道的韓國人群相同,但比日本人群低.[結論]中國人群TNF-α基因啟動子區單核苷酸多態性可能較保守.采用Taqman MGB探針實時定量PCR技術對SNPs進行基因分型簡便、快速及準確,易于自動化,為大規模的疾病相關性研究提供了有效的工具.
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