豬傳染性胃腸炎病毒纖突糖蛋白在畢赤酵母中的分泌表達

豬傳染性胃腸炎病毒纖突糖蛋白在畢赤酵母中的分泌表達

目的:利用巴斯德畢赤酵母表達系統表達豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)纖突糖蛋白S.方法:根據GenBank中豬TGEV纖突耱蛋白S全基因設計一對引物,并在5'引物和3'引物中引入EcoR Ⅰ、Not Ⅰ酶切位點,2.2 kb的目的基因S經PCR擴增后克隆于pBS-T載體,再將S基因經雙酶切從T載體切下并與穿梭質粒pPIC9k連接,Sal Ⅰ線性化重組穿梭質粒pPIC9k-S,電轉化于畢赤酵母GS115感受態細胞,G418篩選鑒定陽性重組子,經甲醇誘導,SDSPAGE檢測誘導后上清.結果:對pPIC9k-S重組酵母表達載體的測序證實巳成功克隆了豬TGEV S基因;重組酵母菌誘導表達后,SDS-PAGE檢測結果顯示表達產物的相對分子質量的為82×103,且S蛋白以可溶性形式分泌表達于胞外.結論:利用巴斯德畢赤酵母真核表達系統成功表達了豬傳染性胃腸炎病毒(河北分離株)纖突糖蛋白S.

作 者： 康雪燕 張莉 姜世金 張培君 KANG Xue-Yan ZHANG Li JIANG Shi-Jin Zhang Pei-Jun   作者單位： 康雪燕,姜世金,KANG Xue-Yan,JIANG Shi-Jin(山東農業大學,動物醫學院,山東,泰安,271018)

張莉,張培君,ZHANG Li,Zhang Pei-Jun(北京市農林科學院,畜牧獸醫研究所,北京,100097) 

刊 名： 生物技術通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號： Q78  關鍵詞： 豬傳染性胃腸炎病毒   纖突糖蛋白   巴斯德畢赤酵母   分泌表達  

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