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人內皮抑素抗腫瘤相關肽基因的克隆表達及活性研究
目的 克隆并表達人內皮抑素抗腫瘤相關肽,檢測其生物活性.方法 人工合成人內皮抑素1~30位氨基酸(30肽,序列25~31由RGIRGAD改為RGDRGD)所對應的核苷酸序列,連接到質粒pTYB2中,再轉化至大腸埃希菌BL21(DE3)中表達,幾丁質親和層析樹脂一步純化30肽.通過MTT法、雞胚絨毛尿囊膜(CAM)實驗、小鼠體內抑瘤實驗比較30肽和內皮抑素抗腫瘤活性.結果 MTT證實30肽體外對人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)、胃癌7901細胞(SGC-7901)半數抑制濃度IC50為36 μg/ml、47μg/ml,顯著低于內皮抑素IC50179μg/ml、202 μg/ml.CAM實驗中30肽對血管的抑制作用更強.30肽在小鼠體內抑瘤率47.8%,效果優于內皮抑素28.7%.結論 30肽具有更強抗腫瘤活性,有可能成為治療腫瘤的一種新藥物.
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