帕金森病相關蛋白α-共核蛋白的可溶性表達、純化及抗體制備

帕金森病相關蛋白α-共核蛋白的可溶性表達、純化及抗體制備

目的利用分子克隆技術在原核細胞中表達α-共核蛋白(SNCP),并制備兔多克隆抗體.方法從人神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞中提取總RNA,逆轉錄成cDNA.利用PCR技術擴增獲得SNCP的cDNA序列,測序正確后克隆至pQE-30-GST表達載體上,在大腸埃希菌中表達GST-SNCP融合蛋白.融合蛋白純化后免疫新西蘭大白兔,制備特異性抗血清,并對該抗體進行檢測.結果瓊脂糖凝膠電泳顯示獲得的SNCPcD-NA序列為420bp.SDS-PAGE和Western blot分析,表達的融合蛋白呈可溶性,相對分子質量約為45000.以其為抗原制備的SNCP抗血清的ELISA效價達到1:32000,并且該抗體可與BALB/c小鼠腦組織中內源性SNCP發生特異性反應.結論人SNCP可在原核細胞中可溶性表達.用表達的蛋白制備獲得特異性較好的SNCP抗血清,為進一步了解SCNP的結構和功能以及在中樞神經系統退行性疾病的作用提供了必要的實驗基礎.

作 者： 黃銀霞 韓俊 張曉光 姚海蘭 王小凡 張瑾 張寶云 董小平   作者單位： 中國疾病預防控制中心,病毒病預防控制所,傳染病預防控制國家重點實驗室,北京,100052  刊 名： 中國老年學雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(2)  分類號： Q42 Q786  關鍵詞： α-共核蛋白   神經退行性變   原核表達   抗體制備  

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