利用堿性磷酸酶融合表達技術研究神經導向因子netrin-4的功能

利用堿性磷酸酶融合表達技術研究神經導向因子netrin-4的功能

目的:采用堿性磷酸酶(AP4)標記技術研究netrin-4的神經導向功能和受體結合特征,并評估堿性磷酸酶作為標簽分子在真核基因功能研究中的意義.方法:將netrin-4全長及3個結構域編碼區cDNA克隆到堿性磷酸酶表達載體APtag4,成功構建真核表達載體AP4-netrin4、AP4-LNT、AP4-EGFL和AP4-NCT,進而在COS7細胞中表達出含有AP標簽的融合蛋白,并通過神經組織塊培養技術和神經元原代培養技術對其活性進行鑒定.結果:確認了netrin-4的神經突起導向功能.進一步通過對AP標簽進行檢測,發現netrin-4全長、LNT和NCT可與原代培養的神經元表面相結合,而EGFL不結合,說明神經元表面含有netrin-4受體或結合位點,且可能通過LNT和NCT結構域起作用.結論:netrin-4具有明確的神經突起導向功能,在神經元表面含有結合位點,同時發現堿性磷酸酶標簽融合表達技術在真核基因功能研究方面具有一定優勢.

作 者： 秦樹桐 高艷 王利紅 周仁平 張成崗 QIN Shu-Tong GAO Yan WANG Li-Hong ZHOU Ren-Ping ZHANG Cheng-Gang   作者單位： 秦樹桐,高艷,王利紅,張成崗,QIN Shu-Tong,GAO Yan,WANG Li-Hong,ZHANG Cheng-Gang(軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所,北京,100850)

周仁平,ZHOU Ren-Ping(Department of Chemical Biology,College of Pharmacy,Rutgers University,Piscataway,NJ 08854,USA) 

刊 名： 軍事醫學科學院院刊  ISTIC PKU 英文刊名： BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 30(3)  分類號： Q78  關鍵詞： 神經導向因子   netrin-4   堿性磷酸酶   融合表達   基因   神經元  

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