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hIL-10在大腸桿菌中的表達及其生物學活性鑒定
構建了含有人白細胞介素-hIL-10(Human Interleukin 10,hIL-10)基因的重組質粒,在大腸桿菌中的高效表達,并對其生物學活性進行了鑒定.用RT-PCR擴增hIL-10 cDNA,并插入原核表達載體PET-32b.將重組質粒轉入BL21(DE3)感受態細胞,在37℃用IPTG誘導hIL-10表達.表達的重組蛋白經復性純化后,用夾心ELISA法檢測其對外周血單核細胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重組質粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析顯示,克隆的DNA序列和文獻報道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重組蛋白相對分子質量為18 000.活性測定結果顯示,重組蛋白能顯著抑制PBMC合成IFN-γ.這表明構建的PET-32b/hIL-10可以在大腸桿菌中高效表達,經復性和純化后,獲得了具有高純度和活性的hIL-10.
孫自勇,陳俊勇,吳盛,智強,劉建寧,Sun Ziyong,Chen Junyong,Wu Sheng,Zhi Qiang,Liu Jianning(南京大學分子醫學研究所,江蘇,南京,210093)
刊 名： 南京師大學報（自然科學版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 2006 29(3) 分類號： Q78 關鍵詞： 人白細胞介素-10(hIL-10) 克隆 表達 大腸桿菌 生物學活性 夾心ELISA【hIL-10在大腸桿菌中的表達及其生物學活性鑒定】相關文章：
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