微生物的實驗室培養教案

微生物的實驗室培養教案

課題1 微生物的實驗室培養

【課標解讀】

1、知道培養基的基礎知識，進行無菌技術的操作

2、進行微生物的培養

【教學重難點】無菌技術的操作

【教學過程】

（一）引入新課

2007年，由國家標準委和衛生部聯合發布的《生活飲用水衛生標準》（GB 5749-2006）強制性國家標準和13項生活飲用水衛生檢驗國家標準正式實施。新標準中的飲用水水質指標由原標準的35項增至106項，增加了71項。其中，微生物指標由2項增至6項，其中大腸桿菌要求每公升水中不得超過3個。你用什么辦法將他們找到并準確計數？

在傳統發酵技術的應用中，都利用了微生物的發酵作用，其中的微生物來自于制作過程中的自然感染。而在工業化生產中，為了提高發酵的質量，需要獲得優良菌種，并保持發酵菌種的純度。這就要涉及到微生物的培養、分離、鑒別等基本技術。現在我們開始學習微生物的培養和應用專題。

（二）進行新課

一、基礎知識

1、培養基（閱讀教材）

1.1概念（略）

1.2培養基的種類

(1)形態——固體和液體培養基（瓊脂）

(2)成分——天然和合成培養基

(3)作用——選擇和鑒別培養基

思考：1、固體培養基和液體培養基你認為哪個更適合工業生產？為什么？

2、如何區分S型細菌和R型細菌？

3、什么是菌落？

【補充】培養基的類型及其應用：（創新設計）

思考：1、硝化細菌、藍藻與酵母菌的C源和N源有不同嗎？能源呢？

2、結合細胞元素組成說明大多數培養基的組成為何有4類？一定都需要嗎？

1.4培養條件——營養物質（特殊營養物質—生長因子）、PH、氧氣

思考：1、微生物的營養物質就是4類嗎? 牛肉膏和蛋白胨能為微生物提供哪些營養？

2、特殊營養物質是什么？試舉一例。(介紹生長因子)

3、你能將土壤中酵母菌、硝化細菌、乳酸菌、固氮菌分離出來嗎？說一說最佳方案。

4、分離菌種是否一定要選擇培養基？

培養乳酸桿菌時需要添加 維生素 ，培養霉菌時需要將培養基pH調節為 酸性 ，培養細菌時需要將pH調節為 中性或微堿性 。

2、無菌技術（閱讀并思考回答下列問題）

2.1意義、對象

2.2消毒與滅菌的區別

2.3消毒與滅菌的方法、適用對象

思考：1、什么是巴氏消毒法？灼燒滅菌和高壓蒸汽滅菌特別注意什么？

2、以下各項分別適用哪項無菌技術？簡單說明理由

試管口；培養基；接種操作間；葡萄酒；培養皿；接種針（環）；口罩；手；空氣；飲用水

3、無菌技術除了防止培養物被污染外，還具有什么目的？

二．實驗操作（錄像）

1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養基

程序：

計算—稱量—溶化—調pH—滅菌—倒平板

思考：1、為何將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯溶化？

2、制備過程中要調節適宜的PH值，要在哪一個環節操作？為什么？

3、請閱讀倒平板操作（P17）并回答討論1—4

4、試管培養基常制成斜面的作用是什么？

2、接種（4種方法）

2．1平板劃線法：通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基表面。其操作步驟是：

2.1.1目的

2.1.2平板劃線操作（略）

思考：請回答P18討論1—3

2．2 稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布到瓊脂固體培養基上進行培養。當稀釋倍數足夠高時，即可獲得單個細菌形成的標準菌落。

2.2.1目的

2.2.2系列稀釋操作：

①取盛有9mL水的無菌試管6支，編號101、102、103、104、105、106。 ②用灼燒冷卻的移液管吸取1mL菌液注入編號為101試管中，并吹吸3次，使之混勻。

③從101倍液中吸取1mL菌液注入到編號為102試管內吹打均勻，獲得102倍液。依此類推。

思考：為什么操作中試管口和移液管應在離火焰1～2cm處？整個操作過程中使用了幾支移液管？

2．2.3涂布平板操作

思考：1、涂布器操作要點及原因

2、教材P19討論

3、結果分析評價

3．1培養未接種培養基的作用是對照，若有菌落形成，說明培養基滅菌不徹底。

3．2 如果在培養基上觀察到不同形態的菌落，請你分析原因？

3．3 培養12h和24h后的菌落大小、位置相同嗎？；原因是什么？。

4、課題延伸

頻繁使用的菌種利用臨時保藏法保存，長期保存菌種的方法是甘油管藏法。前者利用固體斜面培養基培養后，保存在4℃冰箱中，每3～6個月轉種培養一次，缺點是保存時間較短，容易發生污染和變異；后者將菌種與無菌體積等量混合后保存在－20℃冷凍箱中。

（四）課堂總結、點評

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